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【主要成分與含量】
試 劑 | 數 量 |
抗原包被板 | 1塊 |
標記羊抗犬IgG | 0.5ml |
質控陽性血清 | 1瓶 |
質控陰性血清 | 1瓶 |
樣品稀釋液 | 30ml |
酶標抗體稀釋液 | 20ml |
洗滌液（W）（20×） | 20ml |
底物A、B液 | 各7ml |
終止液（S） | 7ml |
【作用與用途】用于酶聯免疫吸附試驗，檢測犬血清中的抗狂犬病毒IgG抗體。
【用法與判定】
1 需要自備的材料
1.1 去離子水或生理鹽水
1.2 可調移液器
1.3 1000ml的量筒
1.4 酶標儀
1.5 37℃溫箱
2 預備步驟
2.1 血清滅活 將待檢樣品預先在56℃水浴中30分鐘進行熱滅活處理。
2.2 溫度平衡 實驗前將試劑盒從2～8℃冰箱取出，置室溫平衡30分鐘以上。
2.3 版面布置 做好質控陽性、質控陰性血清和待檢樣品的版面布置記錄。
2.4 質控陽性血清、質控陰性血清的稀釋
用0.5ml樣品稀釋液復溶質控陽性血清和質控陰性血清，并作10倍系列稀釋至1:100。
2.5 待檢血清稀釋 將待檢血清10倍系列稀釋至1:100。
3 檢測步驟
3.1 加樣 將1:100稀釋的質控陽性血清、質控陰性血清和待檢樣品按照版面布置加入板孔內，100μl/孔，均作2孔重復。
3.2 孵育 將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，孵育30分鐘。
3.3 洗板 用純化水將濃縮洗滌液進行20倍稀釋備用，棄掉板孔內液體，加洗滌液200μl/孔，洗滌5次，甩干。
3.4 加酶標抗體 用酶標抗體稀釋液按照1：100稀釋酶標抗體，100μl/孔。
3.5 孵育 將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，孵育60分鐘。
3.6 洗板 棄掉孔內液體，加洗滌液200μl/孔，洗滌5次，甩干。
3.7 顯色 底物A、B液等體積混合，每孔加100ul。
3.8 孵育 將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，避光孵育20min。
3.9 終止 每孔加終止液50μl，5分鐘內測定結果。
3.10 檢測 用酶標儀測定并記錄各孔在450nm波長處的吸光度（OD450nm）值。
4 結果判定
4.1 測有效性 當質控陽性血清OD450nm值≥0.6，質控陰性血清OD450nm值≤0.1，試驗有效。
4.2 檢測結果判定 待檢樣品OD450nm值≥質控陽性血清OD450nm值，認為待檢樣品血清抗體達到保護水平（0.5IU/ml），待檢樣品OD450nm值＜質控陽性OD450nm值，則認為待檢樣品血清抗體未達到保護水平（0.5IU/ml）。
【注意事項】
（1）本試劑盒僅用于檢測犬血清中狂犬病毒IgG抗體。
（2）不要使用過了有效期的試劑，不同批次試劑盒的成分不要混用。
（3）所有試劑2～8℃儲存，使用前所有的試劑需平衡至室溫。
（4）所有的試劑避免接觸皮膚和眼睛，如果碰到，立即用冷水沖洗接觸處。
（5）在樣品采集，儲存和運輸過程中避免污染。
（6）避免溶液被金屬離子、氧化劑和清潔劑污染，每個容器一定要清潔，對酶標記物和底物不要使用同一個容器和吸頭。
（7）檢測樣品預先進行熱滅活（56℃、30min），建議樣品在-20℃條件下保存。操作過程中的移液、時間和洗滌都必須精確控制。
（8）試劑盒開封后未用完的試劑盒，質控陰性和陽性血清應-20℃以下凍存，其余試劑應2～8℃保存，ELISA板條密封條件下2～8℃保存，可于1個月內用完。
【規格】96孔/盒
【貯藏與有效期】2~8℃保存，有效期為12個月。
【批準文號】獸藥生字031418122
